A técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) proporcionou avanços significativos na pesquisa científica e diagnóstico o que resultou em muitos benefícios à sociedade desde a sua invenção. As aplicações da técnica de PCR vão desde a investigação de paternidade, investigações forenses, análise de expressão gênica e diagnóstico de muitas doenças. PCR Convencional A PCR convencional consiste na replicação de sequências específicas de DNA utilizando equipamentos denominados termocicladores também chamados de máquinas de PCR. A reação da PCR ocorre acrescentando-se às amostras de material genético as sequências iniciadoras (primers) os desoxirribonucleotídeos (dNTP's) e a Taq DNA polimerase.

No termociclador ocorre a variação cíclica de temperatura que faz com que haja a desnaturação do DNA, o anelamento de primers e a replicação do fragmento pela enzima Taq DNA polimerase. Depois de um determinado número de ciclos, tem-se milhares de cópias da sequência gênica de interesse. PCR em tempo real (qPCR) A técnica da PCR quantitativa (qPCR) se baseia nos princípios básicos da PCR mas permite que o material amplificado seja quantificado em tempo real, o que permite uma rapidez na obtenção dos resultados. Os termocicladores são capazes de detectar os sinais emitidos por reagentes específicos à medida que o DNA é amplificado.

RT-PCR Na Polimerase por Transcriptase Reversa (RT-PCR), moléculas de RNA são convertidas em DNA complementar (cDNA) pela enzima transcriptase reversa. Em seguida, os cDNAs são amplificados pelo mesmo princípio da PCR convencional.

Importância da qualidade dos consumíveis para as reações da PCR

Todas as reações de PCR ocorrem em ciclos de altas e baixas temperaturas o que requer sempre atenção especial na seleção de materiais que serão utilizados o que inclui os reagentes para PCR, e os consumíveis para PCR (tubos para PCR, placas para PCR, tampas e filmes selantes para PCR). Consumíveis para PCR fabricados de materiais inadequados podem liberar inibidores e contaminantes que irão interferir na reação comprometendo a sensibilidade e especificidade da técnica. Os consumíveis plásticos para PCR requerem um nível muito mais alto de atenção no design e fabricação quando comparados aos outros consumíveis plásticos. O material ideal para as microplacas para PCR ou strips para PCR em tempo real deve ser o prolipropileno com pureza voltada para Biologia Molecular, esse material não sofre deformação em altas temperaturas, com o contato com o termociclador, além de reter pouco ingrediente da reação.

Além disso, devem ter certificados livres de DNases, RNases e pirogênios. A técnica de PCR em tempo real permite uma elevada sensibilidade e especificidade da intensidade da fluorescência emitida a qual é detectada a cada ciclo de amplificação da sequência de DNA alvo e o uso de tubos e microplacas adequadas e de qualidade fazem toda a diferença uma vez que podem influenciar na quantificação do sinal. As microplacas e tubos para PCR em tempo real tem a mesma finalidade, a escolha vai depender do número de amostras a ser processado, se há um número pequeno de amostras, como em estudo piloto, ou numa necessidade de repetição de um experimento, o ideal é optar pelos tubos individuais ou strips para PCR.

Nos tubos/strips e nos poços das microplacas para PCR é onde a reação ocorre, o equipamento para PCR ou termociclador, utiliza uma fonte de luz que excita o fluorocromo envolvido na reação. A amostra então produz uma fluorescência a qual é detectada pelo sistema, essa é proporcional à quantidade inicial de alvos que estão sendo amplificados. Para aplicações de PCR em tempo real, diferentemente da PCR convencional, as cores das microplacas utilizadas podem influenciar no resultado, dessa forma, são utilizadas microplacas brancas e microplacas transparentes. As microplacas transparentes são mais utilizadas, pois proporcionam melhor visualização no momento da pipetagem. Contudo, alguns instrumentos para PCR específicos recomendam as microplacas brancas.

Quanto ao volume, estão disponíveis no mercado microplacas de 0,1ml utilizadas para reações “fast PCR”, que permitem ao mesmo tempo a economia de reagentes, e as microplacas de 0,2 ml. Além disso, temos microplacas para PCR sem borda, microplacas para PCR com borda elevada, e microplacas para PCR com meia borda ou semi-borda, a escolha deve ser baseada na compatibilidade do equipamento que será utilizado.

Os diferentes tipos de placas tem compatibilidade com os diferentes padrões de termocicladores disponíveis no mercado como: Applied Biosystems ABI, ABI 7500, QuantStudio™, StepOnePlus™, Veriti™, Applied Biosystems 9800 Fast, 7900HT Fast, Roche LightCycler®, Biorad CFX systems, Agilent AriaMx, Analytik Jena qTOWER³ e Techne Quantica, observado na Tabela 1 abaixo. As microplacas para PCR Novas Bio contemplam todas as características e compatibilidade necessárias para uma reação de PCR com sensibilidade máxima! A qualidade é vista em cada detalhe do produto mostrando experiência e comprometimento para oferecer produtos que proporcionam resultados confiáveis e que contribuem para uma ciência de qualidade.

Tabela 1 – Tipos de microplacas para PCR Novas Bio

Código	Volume	Descrição	Compatibilidade
PCR96-LP- AB-C	0.1 ml	Placa para PCR de 96 poços, meia borda elevada, transparente. Otimizada para PCR fast. Perfil baixo. Canto chanfrado único em A1.	ABI, Quant Studio 3, 5, 6, 7, Step One Plus, Veriti, 9800 Fast, 7900 HT, 7500 Fast
PCR96-AB-C	0.2 ml	Placa de PCR de 96 poços, meia-borda elevada, transparente. Canto chanfrado único no A12.	ABI QuantStudio 3, 5, 6, 7, 9700, 7500
HP96-LPSSR-CC	0.1 ml	Placa para PCR de 96 poços, meia borda, moldura transparente e poços transparentes, estrutura em policarbonato rígido.	Roche LightCycler®
HP96-LPSSR-WW	0.1 ml	Placa para PCR de 96 poços, semi-borda, Moldura branca, poços brancos, estrutura em policarbonato rígido.	Roche LightCycler®
HP96-LPFS-BKC	0.1 ml	Placa para PCR de 96 poços, borda elevada, moldura preta, poços transparentes, estrutura em policarbonato rígido (hard shell).	Biorad CFX systems, Agilent AriaMx, Analytik Jena qTOWER³,
HP96-LPFS-WW	0.1 ml	Placa para PCR de 96 poços, borda elevada, moldura branca, poços brancos, estrutura em policarbonato rígido (hard shell).	Biorad CFX systems, Agilent AriaMx, Analytik Jena qTOWER³ e Techne Quantica.
PCR96-HS-C	0.2 ml	Placa de PCR de 96 poços, meia borda, transparente. Perfil padrão. Canto chanfrado único na A12.
PCR96-FLT-C	0.2 ml	Placa de PCR de 96 poços, sem borda, transparente. Perfil padrão. Canto chanfrado único na A12.
PCR96-LP-FLT-C	0.1 ml	Placa de PCR de 96 poços, sem borda, transparente. Canto chanfrado único na A12.
PCR96-LP-FLT-W	0.1 ml	Placa de PCR de 96 poços, sem borda, branca. Perfil baixo.
PCR96-AB-C	0.2 ml	Placa de PCR de 96 poços, borda elevada, transparente
PCR384-C	40 uL	Placa para PCR de 384 poços contornado, transparente. Canto chanfrado único na A24
PCR384-W	40 uL	Placa para PCR de 384 poços contornado, branca. Dois cantos chanfrados em A24, P24.	Roche Lightcycler® 480

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