A Reação de Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR) evoluiu de forma significativa, se tornando uma técnica padrão-ouro. Semelhante a PCR convencional, porém com a diferença da inclusão de sondas fluorescentes que se ligam ao DNA-alvo amplificado. A partir de um único fragmento de DNA, a qPCR permite a rápida amplificação do DNA-alvo em milhões de cópias, e o monitoramento do resultado acontece durante o processo através da emissão de fluorescência a medida que o DNA é amplificado, sendo possível determinar com exatidão a quantidade do fragmento. A PCR em tempo real é utilizada em diversas áreas como marcadores genéticos específicos, diagnóstico de doenças, medicina forense, análises clínicas, controle de qualidade industrial, principalmente na detecção do diagnóstico do SARS-CoV-2.

A PCR em tempo real (qPCR) é uma técnica sensível, gerando resultados de alta qualidade, porém o uso de material impróprio pode interferir com contaminações e inibidores, durante a reação as amostras e reagentes são submetidos a altas temperaturas, nas seguintes etapas - Denaturação: ocorre a separação da fita dupla de DNA, surgindo a fita simples de DNA; Anelamento: as sondas ou primers, responsáveis por identificar o trecho de interesse, se ligam a fita de DNA que se pretende amplificar; Extensão: a Taq DNA polimerase inicia a extensão do novo fragmento de DNA, formando a nova dupla-fita de DNA, acontecendo a amplificação do fragmento de DNA. Essas etapas são repetidas por pelo menos 40 vezes, até atingir milhões de cópias do fragmento de DNA-alvo, assim a escolha de reagentes são ideias para o sucesso da reação.

A empresa dinamarquesa Ampliqon entrega no mercado enzimas e reagentes de alta qualidade e especificidade para biologia molecular, que garantem uma amplificação robusta do DNA-alvo. Dentre os produtos encontramos o RealQ Plus 2x Master Mix Sybr Green ou TaqMan, ambos os reagentes contêm a tecnologia Hot Start DNA polimerase, que torna a enzima Taq termoestável, garantindo a alta especificidade e ótima amplificação, evitando falsos positivos. Além do sistema de tampão em ótimas concentrações, que garantem a otimização do tempo da reação. Ambos disponíveis na versão com ROX (baixo ou alto), importante para a normalização do sinal fluorescente, minimizando erros de pipetagem, bolhas durante o processo de montagem da placa, até mesmo calibração para o equipamento, ou a versão sem ROX.

Importantes publicações

O RealQ Plus 2x Master Mix Sybr Green foi utilizado por Kosari F. e colaboradores, para investigar o efeito antimicrobiana e preventivo da canela como agente protetor no câncer de colón, através da análise de expressão gênica de clbB e a formação de biofilme de isolados de E. coli, avaliados por qPCR, utilizando o Master Mix SYBR Green (Ampliqon), garantindo a qualidade dos resultados e a boa publicação. Artigo científico intitulado “Evaluation of cinnamon extract effects on clbB gene expression and biofilm formation in Escherichia coli strains isolated from colon cancer patients”. Publicado na revista BMC Cancer em 2020, de autoria de Kosari e colaboradores.

• Artigo científico intitulado “Decreased serum microRNA-21 level is associated with obesity in healthy and type 2 diabetic subjects.” Publicado na revista Archives of Physiology and Biochemistry em 2018. Ghorbani e colaboradores investigaram através da qPCR a expressão de miRNAS como biomarcadores de diabetes, em amostras de soro de pacientes diabéticos e saudáveis.
• Artigo científico intitulado “Association of HPV16 and 18 genomic copies with histological grades of cervical lesions.” Publicado na revista Virusdisease em 2019. Joharinia e colaboradores investigaram com a presença do vírus HPV 16/18 em amostras de tecido através da reação qPCR.