PureIT ExoZAP - OneStep PCR Clean-up

SOLICITAR ORÇAMENTO    Compre pela NeobioShop

Descrição do Produto

Reagente enzimático para purificação pós-PCR, o PCR CleanUp PureIT ExoZAP é composto por uma combinação equilibrada de Exonuclease I termolábil (HL-ExoI) e fosfatase alcalina de camarão recombinante (rSAP), desenvolvido para o tratamento rápido e eficiente de produtos amplificados por PCR.

O tratamento com PCR CleanUp PureIT ExoZAP remove primers residuais e DNAs de fita simples, além de inativar o excesso de dNTPs por meio de defosforilação. O reagente é adicionado diretamente à reação de PCR, sem necessidade de etapas adicionais de purificação, tornando o fluxo de trabalho mais simples e rápido.

Após incubação a 37 °C por no mínimo 2 minutos, o PCR CleanUp PureIT ExoZAP é completamente inativado por aquecimento a 80 °C por pelo menos 3 minutos, garantindo que o produto purificado esteja pronto para aplicações subsequentes.

Para que serve

• Purificação de produtos de PCR antes de aplicações downstream
• Remoção de primers residuais após amplificação
• Degradação de DNA de fita simples não desejado
• Inativação de dNTPs excedentes por defosforilação
• Preparo de amostras para sequenciamento, extensão de primers e análise de SNP

Principais Benefícios

• Protocolo rápido e simples, sem colunas ou beads
• Adição direta ao produto da PCR
• Alta eficiência na remoção de contaminantes da reação
• Enzimas termolábeis com fácil inativação por calor
• Compatível com diversas aplicações de biologia molecular

Protocolo de Uso

Este protocolo serve como guideline para o clean-up de 5 μL de produtos de PCR utilizando PCR CleanUp PureIT ExoZAP.

1. Retire o PCR CleanUp PureIT ExoZAP do freezer a -20 °C.
2. Mantenha o reagente sobre gelo durante todo o manuseio.
3. Agite bem o tubo e suspenda a agitação gradualmente.
4. Incube a reação a 37 °C por 2 a 5 minutos para degradar primers remanescentes, DNA de fita simples e inativar dNTPs em excesso.
5. Incube a 80 °C por 3 a 10 minutos para inativação completa das enzimas.
6. Utilize os produtos purificados da PCR em aplicações subsequentes.

Aplicações Após o Clean-Up

• Sequenciamento de DNA
• Extensão de primers
• Análise de SNP

Armazenamento

• Armazenar o reagente a -20 °C
• Após o tratamento, os produtos da PCR podem ser armazenados a -20 °C

Notas Importantes

• Para volumes maiores de produto de PCR, aumentar proporcionalmente a quantidade de PCR CleanUp PureIT ExoZAP.
• Manter o reagente sempre em gelo durante o preparo da reação.

Perguntas Frequentes (FAQs)

É necessário purificar o produto da PCR por coluna ou beads?
Não. O PCR CleanUp PureIT ExoZAP elimina a necessidade de métodos tradicionais de purificação.

As enzimas permanecem ativas após o tratamento?
Não. As enzimas são completamente inativadas após incubação a 80 °C.

O produto é compatível com sequenciamento?
Sim. Os produtos purificados são indicados para sequenciamento, extensão de primers e análise de SNP.

Posso armazenar o produto após o tratamento?
Sim. Os produtos tratados podem ser armazenados a -20 °C até o uso.

PCR Clean-up OneStep otimiza seus resultados de sequenciamento. Clean-up fornece resultados em 5 minutos.

Características:
-Protocolo rápido de 5 minutos.
-Não necessita de colunas Spin ou contas magnéticas.
-Tratamento melhora aplicações downstream, como sequenciamento de DNA e análise de SNPs.
-Ideal para a preparação de protocolos em construção de bibliotecas em sequeciamento de última geração (NGS).






Embalagens:

Código	Reações
A620601	100
A620603	500
A620606	2500
A620607	5000

PCR product of 866 bp was amplified using TEMPase DNA Polymerase in Ammonium Buffer. The PCR product was spiked with dNTP’s and primers and then treated (A) without PureIT ExoZAP PCR CleanUp (B) with PureIT ExoZAP PCR CleanUp (2 +3 min) and (C) with an enzymatic PCR clean-up reagent from a competting brand (1+ 4 min) prior to Sanger sequencing. All samples were analyzed in triplicates and according to manufactures recommendations. Sanger sequencing result was compared by graphically plotting the number of base calls with certain quality values (Phred score). Treatment of PCR products with PureIT ExoZAP significantly improves the quality of DNA sequencing. Furthermore, PureIT ExoZAP PCR CleanUp showed PCR clean-up results equivalent to the competing PCR clean-up reagent. *Data with Quality values less than 10 is not included.





Sanger sequencing results of the 866 bp PCR product. The depicted electropherograms are either after treatment with PureIT ExoZAP PCR CleanUp (top) or untreated (bottom). Sequence shown is approximately the region from 250 - 300 bases. Treatment of spiked PCR product with PureIT ExoZAP PCR CleanUp significantly improves the quality of Sanger Sequencing. Treatment enhances signal intensity and eliminates background interference and base miscalls.